智立中特(武汉)生物科技有限公司
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详细介绍
细胞名称:人卵巢癌细胞OVCA433

产品规格:T25培养瓶x1;1.5ml冻存管x2

细胞数量:1x10^6;1x10^6

保存温度:37℃;-198℃

运输方式:常温保温运输;干冰运输

安全等级:1

用途限制:仅供科研2类

培养体系:DMEM高糖培养基+10%FBS+1%三抗

培养温度:37℃

二氧化碳浓度:5%

简介:人卵巢癌细胞OVCA433取自女性供体,贴壁培养。

一、运输和保存

干冰运输及复苏好存活细胞

(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱**夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理

1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

3)半贴细胞和贴壁不牢(悬浮)细胞:T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h,显微镜下观察细胞的情况,若细胞密度在60%以下,客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用**培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养,若细胞生长70%-90%对细胞进行传代,传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。

4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的。

二.细胞处理:

1)冻存细胞的复苏:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL**培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,**培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml**培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。**天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达70%-90%,即可进行传代培养。

该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞,传代可以参考以下方法:

1.收集:将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

2.加入0.25%(w/v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

3.将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的**培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

3)细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
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联系人: 肖** 女士 (经理)  
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